用基因组dna剪接技术克隆siga相关基因

目的：克隆分泌型iga（siga）相关基因--j链基因(igj)、多聚免疫球蛋白受体基因（pigr）和iga重链恒定区基因（igha），为进一步构建siga真核表达质粒奠定基础。方法：采用本室建立的"基因组dna剪接"技术，根据已发表的igj、pigr和igha的核苷酸序列，通过计算机软件分别设计各个基因片段外显子的优化引物，从人外周血基因组dna中直接扩增各基因的外显子序列；然后人工设计融合相邻外显子的融合引物，采用重叠pcr技术，把各基因片段的外显子串联起来形成全长编码序列，完成基因组dna的体外剪接。扩增的pcr产物纯化后克隆到pgem-teasyvector中，通过dna测序对阳性克隆进行分析鉴定。结果：pcr扩增的igj、pigr和igha基因与预期大小一致；测序结果表明本实验获得的上述基因与genbank中的目标基因序列完全一致。结论：本文通过基因组dna剪接技术成功克隆人类siga三个相关基因，提示此技术是合成多外显子cdna的有效手段。