蓝藻正反义pepca基因导入对大肠杆菌中脂类合成的调控

为了探索原核生物中磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶（pepc）在调控脂类代谢中的作用。pcr法扩增了鱼腥藻anabaenasp.pcc7120pepc基因中含保守结构域fa的一段基因片段pepca，并将其克隆到pmd18-t载体上。将pepca正反向连接到穿梭表达载体prl-489上bamhi位点之间，构建得带有pepca正反义基因的载体prl-senpepca和prl-antipepca，转化入大肠杆菌（escherichiacoli）dh5a宿主细胞中。分析结果表明：pepca片段的转入对宿主菌的生长影响不大；与野生型细胞相比较，转反义pepca片段e.coli中pepc酶活性降低到野生菌的30.2%，蛋白合成减少23.6%，脂类的合成增加了46.9%，；而转正义pepca片段e.colipepc酶活性是野生菌的2.38倍，蛋白合成增加了14.5%，脂类合成减少了49.6%；转基因菌中十八碳酸的含量明显增加。上述结果可能为利用原核生物做生物柴油原料提供线索。