兽疫链球菌透明质酸分解酶基因的敲除

以透明质酸分解酶基因（hyl）为改造目标,利用同源重组技术获得hyl基因敲除的重组菌。首先以兽疫链球菌的基因组dna为模板扩增出部分透明质酸分解酶基因（hyl-1），然后将其克隆到载体pmd19-t上，再以质粒puc19为模板,pcr扩增得到氨苄青霉素抗性基因,通过反向pcr将其插入hyl-1基因的中部，得到基因敲除载体pmd19t-sa。该载体与质粒pbr322分别用ecorⅰ、pstⅰ双酶切后进行连接,得到基因敲除的重组载体pbr322sa，pcr及限制性酶切分析,构建的敲除载体与设计结果相符。最后,利用这两种敲除载体通过同源重组技术得到一株重组菌,经pcr及酶活鉴定,这株菌的hyl基因已缺失。