α-突触核蛋白n-端结构域参与线粒体功能的调控

目的：确定α-synuclein蛋白与线粒体相互作用的功能结构域，并检测该结构域对线粒体功能的影响。方法：构建重组融合蛋白质粒pcmv-myc/α-syn-wt、pcmv-myc/α-syn-n和pcmv-myc/α-syn-△n，转染人胚肾hek293t细胞，通过免疫共沉淀明确α-synuclein蛋白与线粒体相互作用的功能结构域。使用表达α-synuclein蛋白的病毒上清感染小鼠多巴胺能神经细胞mn9d，通过免疫荧光、流式细胞术检测线粒体膜电位及cytochromec释放。结果：成功构建了pcmv-myc/α-syn-wt、pcmv-myc/α-syn-n和pcmv-myc/α-syn-△n融合蛋白质粒，免疫共沉淀明确α-synucleinn-端为其功能结构域，jc-1染色发现n-端使线粒体膜电位降低，流式细胞术证实n-端使cytochromec释放明显增加。结论：α-synucleinn-端是其与线粒体相互作用的功能结构域，n-端降低线粒体功能。