5-aza-dc在mes细胞向生殖细胞分化中的dna甲基化调控机制

目的:探讨小鼠胚胎干细胞(mouseembryonicstemcells,mescs)向生殖细胞(embryonicgermcells,eg)分化过程中5-杂氮-2'-脱氧胞苷(5-aza-2'-deoxycytidine,5-aza-dc)对dna甲基化转移酶dnmt1和dnmt3a及生殖细胞特征基因mvh表达变化的dna甲基化调控机制。方法:将mes细胞分化形成拟胚体(embryoidbodies,ebs)作为向生殖细胞分化的启动步骤,采用不同浓度(0.05μmol/l,0.1μmol/l,0.5μmol/l,1μmol/l,3μmol/l)处理ebs,rt-pcr实时荧光定量rt-pcr和westernblot分别检测检测在5-aza-dc处理前后dnmt1和dnmt3a在es细胞和ebs中的表达,甲基化特异性pcr(msp)检测原始生殖细胞分化特征基因mvh启动子甲基化状态。结果:5-aza-dc的浓度在0.05μmol/l~1μmol/l之间时,ebs保持较高的存活率而ebs的形态明显发生了变化;5-aza-dc处理后,dnmt1和dnmt3a在ebs中mrna表达量明显降低,其变化特点与wb结果相一致。msp和测序结果显示,mvh启动子区表现为部分甲基化,5-aza-dc处理后的4debs中mvhcpg岛有4个cg位点发生突变,而mes细胞中未见突变。结论:ebs经5-aza-dc处理后,dnmt1和dnmt3a的表达明显下调;同时,mvh启动子发生部分甲基化,有可能启动了向生殖细胞的分化进程。