腺病毒介导的人抑瘤素m基因对a375人黑色素瘤细胞的抑制作用

目的:构建抑瘤素m(osm)重组腺病毒载体,研究其对人黑色素瘤细胞a375的抑制作用。方法:以pegz-osm重组质粒为模板,通过pcr技术扩增出osm片段,采用腺病毒载体的基因重组和体外包装技术获得表达与人osm氨基酸序列相同的重组腺病毒子ad-osm,感染a375细胞,用荧光显微镜、rt-pcr、westernblot法检测osm在a375细胞中的转录和表达;荧光显微镜观察a375细胞的形态学改变;mtt法和流式细胞术(fcm)检测ad-osm对a375细胞的生长抑制和细胞周期的抑制效应;半定量rt-pcr法检测osm基因表达对a375细胞中的bax、bcl-2基因表达的影响。结果:基因测序和pcr分析结果显示,成功构建了ad-osm腺病毒表达载体;rt-pcr和westernblot法检测到osm基因在a375细胞中的转录和表达;osm基因的表达对a375细胞增殖有明显抑制作用,并可诱导细胞凋亡,osm基因可通过上调细胞中bax和下调bcl-2基因表达诱导细胞凋亡。结论:成功构建了ad-osm腺病毒表达载体,感染osm基因可明显抑制a375人黑色素瘤细胞的生长,诱导其凋亡,该现象可能是通过改变bax、bcl-2基因表达水平来发挥抗肿瘤作用。