人β2-glycoproteini及其第v结构域蛋白的原核表达、纯化和活性鉴定

目的:旨在重组表达人源β2-gpi及其第v结构域基因,探讨后者在抗自身免疫性动脉粥样硬化实验中的干预作用。方法:以实验室保存的cta727-1重组质粒为模板克隆β2-gpi及其第v结构域基因,构建pet32-β2-gpi和pet32-dv重组表达载体,分别转化至大肠杆菌rosetta-gami。经iptg诱导表达,镍离子亲和层析柱纯化重组蛋白,并采用westernblot、hptlc和elisa方法验证了重组蛋白的活性与功能。结果:β2-gpi及其第v结构域目的基因被分别克隆至原核表达载体pet-32a-c(+),诱导出具备cl和oxlig-1结合活性的β2-gpi及第v结构域融合蛋白,elisa实验显示第v结构域融合蛋白可抑制oxlig-1/(r)β2-gpi/antibody免疫复合物的形成。结论:成功构建了pet32-β2-gpi及pet32-dv表达载体,获得高水平表达且具备活性的β2-gpi和第v结构域重组蛋白,为研究治疗动脉粥样硬化等疾病的多肽药物奠定了基础。