重组plzf蛋白锌指结构域的表达、提纯和活性分析

plzf(promyelocyticleukaemiazincfingerprotein)是一种重要的转录抑制因子,它由位于n端的btb结构域和c端的锌指结构域构成。鉴于目前对于锌指结构域的立体结构还不是十分清楚,对其进行了高效表达和提纯。为了表达plzf蛋白的锌指结构域,在其编码序列的5'端加上起始密码atg后插入到表达载体pet-11a的多克隆位点。构建好的表达质粒转化到bl21(de3)大肠杆菌内并用iptg诱导表达,发现重组蛋白主要以不溶性的包涵体形式在胞内表达。用含有sds变性剂的缓冲液溶解包涵体后,采用凝胶过滤方法将重组蛋白纯化到纯度达96%以上。对纯化后的蛋白质用反透析的方法进行复性,然后用dna结合实验进行活性分析,发现复性后的蛋白质具有特异的dna结合活性,这为进一步研究plzf蛋白锌指结构域的立体结构打下了重要基础。