鸡源细胞基因沉默及快速筛选的实用型双标记rnai载体

利用人h1rna启动子、egfp基因及neomycin抗性基因,构建用于禽类细胞基因持续沉默和快速筛选的实用型rnai载体。在将pcdna3.1(+)载体上的sv40启动子替换为鸡源的β-actin启动子后,装入egfp基因表达框以及用于驱动外源shrna转录的人h1rna启动子,构建成同时具有egfp和neomycin抗性双标记的rnai载体,并为载体引入独特设计的含媒介序列的多克隆位点以方便外源shrna编码小片断插入后的快速筛选,载体设计非常实用。插入靶向egfp和sigmλ基因的shrna编码序列后分别瞬时转染df-1和dt40细胞,结果显示靶基因表达得到了明显抑制。联用egfp和neomycin双标记快速筛选sigmλ轻链基因稳定沉默的dt40细胞克隆的结果也证实,h1启动子转录shrna的干扰效果是高效的,双标记筛选策略不仅有效而且方便、快捷。