基于易错pcr定向进化扩展青霉penicilliumexpansumfs1884碱性脂肪酶

为改善扩展青霉fs1884碱性脂肪酶的活性及酶学性质,利用连续两轮易错pcr对扩展青霉fs1884脂肪酶基因pel进行随机突变,在大肠杆菌jm109中构建突变文库。含突变脂肪酶基因的重组质粒电击转化巴斯德毕赤酵母gs115,经过ypom板初筛和橄榄油检验板复筛,获得一株酶活性提高的脂肪酶突变体:pel-ep25-gs。与野生型脂肪酶pel-gs相比,在最适温度40℃、ph9.4时突变体的酶活力是野生型酶的1.3倍。测序结果表明:该突变体第253位氨基酸发生了突变,由赖氨酸变成蛋氨酸。