乙酰氨基半乳糖转移酶14(galnt14)在毕赤酵母中的表达纯化及活性鉴定

将galnt14全长编码区克隆到分泌型酵母表达载体ppic9k中,构建重组载体ppic9k-t14,经电转至毕赤酵母gs115中表达,使用g418筛选高表达重组菌,并对诱导条件进行优化,表达产物使用sds-page分析、westernblot鉴定、sephadexg-100纯化、最后经hplc检测活性。结果显示,在提供更好的供氧量条件下,用0.75％甲醇诱导可提高目的蛋白的表达量而降低杂蛋白的表达。培养上清液经sds-page检测显示目的蛋白分子量约64kda;westernblot结果显示在相应分子量处有一条特异性条带;利用sephadexg-100成功分离纯化了目的蛋白;活性测定结果显示所获得的目的蛋白具有催化活性,为深入研究galnt14的结构与功能奠定了基础。