ad-ang1-ires-vegf165腺病毒载体的构建及其促血管形成作用

目的:构建人血管生成素1(ang1)和血管内皮生长因子vegf165(vegf165)的共表达腺病毒载体ad-ang1-ires-vegf165(简称ad-av),为研究ad-av转基因细胞表达产物血管诱生活性提供实验依据。方法:采用ires介导的ang1和vegf165双基因腺病毒共表达模式,通过常规的基因克隆和重组技术,构建ad-av双基因共表达腺病毒载体,经感染人胚肾qbi-293a细胞(293a)进行扩增和效价测定后,再感染wi-38人胚肺成纤维细胞,均用elisa法检测vegf、ang1目的基因的表达,并采用鸡胚尿囊膜血管形成实验(cam)法分析其对血管形成的影响。结果:扩增的ad-av腺病毒效价可达4×1010pfu/ml;ad-av不仅能在293a细胞中成功表达目的基因ang1、vegf,而且在wi-38成纤维细胞也能成功表达,其表达产物具有显著的促进cam上血管生成的活性。结论:成功构建并获得了ad-ang1-ires-vegf165重组病毒子,目的基因均能在人胚肾和人胚肺成纤维细胞中表达,其表达产物具有诱导血管形成的功能。