利用red重组系统快速构建基因打靶载体

基因敲除小鼠模型是在哺乳动物体内研究基因功能最可靠的方法之一。利用常规的分子克隆的方法构建基因打靶载体往往工作周期长,对于难度特别大的基因有时甚至无法完成打靶载体的构建。通过合理应用red重组系统和低拷贝中间载体,利用50bp的同源重组序列直接从bac载体中克隆了长片段的小鼠基因组序列;将得到的基因组序列再次通过重组和改造,构建了gpr56等基因的完全敲除并带有报告基因的打靶载体,实现了打靶载体的快速构建。