新城疫病毒3种检测方法的研究比较

目的:利用3种方法对新城疫(newcastlediseasevirus,ndv)病毒进行检测并对这3种检测方法的优缺点做出比较。方法:分别将ndv强毒f48e9和弱毒lasota接种spf鸡胚后,获取尿囊液。利用双抗夹心elisa法、悬液芯片系统以及rt-pcr进行检测。通过对制备的针对新城疫病毒的抗体4d9和6c4蛋白浓度测定后,选择6c4进行生物素标记,将4d9作为固相捕获抗体,利用生物素-链霉亲和素放大系统构建双抗夹心检测体系。通过对genebank上已发表的新城疫强弱毒f基因进行电脑分析后,设计一组针对ndv强弱毒的通用型引物,分别对强弱毒进行rt-pcr并检测其检出限。结果:elisa法对ndv强弱毒尿囊液的检出灵敏度为1:160,但操作繁琐,耗时长;液相芯片对强弱毒尿囊液的检出限为1:160和1:320,然而和elisa相比,操作较为方便,但仪器设备昂贵。rt-pcr对强弱毒rna检出限分别为259pg和14pg,与前两种方法相比,pr-pcr在核酸水平上对病毒进行检测,理论上灵敏度较高,但是所需试剂、设备昂贵,且实验人员还需一定的技能培训。