甲型h1n1流感病毒ha基因在昆虫细胞中的截短表达

目的:利用bac-to-bacbaculovirusexpressionsystem表达重组ha蛋白,westernblot及ifa方法鉴定其表达。方法:采用pcr方法扩增a/california/04/2009(h1n1)ha基因,将其克隆到pfastbachta载体上,重组质粒pfastbacht-ha经双酶切及测序鉴定正确后,转化阳性重组载体进入e.colidh10bac感受态细胞中,通过bluo-gal蓝白斑筛选、pcr鉴定获得重组转座子rbacmid-ha。从重组转座子中提取rbacmid-ha质粒dna转染sf9昆虫细胞,制备重组杆状病毒。重组杆状病毒感染sf9细胞表达重组蛋白,westernblot及ifa鉴定重组蛋白表达情况。结论:成功构建了甲型h1n1流感病毒ha基因的昆虫杆状病毒表达载体,该表达载体转染昆虫细胞后制备的重组杆状病毒病毒滴度较高,重组杆状病毒表达的重组蛋白经westernblot及ifa鉴定后具有良好的免疫反应原性。