钝齿棒杆菌argr基因克隆、表达及其重组菌发酵产精氨酸研究

钝齿棒杆菌(corynebacteriumcrenatum)as.m7是筛选获得的一株高产精氨酸生产菌株。argr是精氨酸合成过程中的一种调控蛋白。为进一步验证其在钝齿棒杆菌中对精氨酸合成量的影响,利用特异性引物,分别扩增标准菌c.creantumas1.542和诱变菌c.creantumas.m7的argr全长基因,测序后比较二者的差异;结果表明标准菌argr基因orf全长516bp,编码一个含172个氨基酸残基的蛋白;而诱变菌argr基因的109位碱基由c替换为t,导致argr蛋白在钝齿诱变菌中表达被提前终止。同时,将来源于标准菌的argr基因连接到穿梭表达载体pxmj19中,电击转化至诱变菌c.crenatumas.m7得到重组菌株,用摇瓶发酵的方法观测重组菌产精氨酸量的变化。sds-page和westernblot分析证明标准菌的argr基因在诱变菌中得到了表达。对重组诱变菌产精氨酸量进行了测定,结果显示:产精氨酸能力由原来7.8mg/ml下降至2.5mg/ml,下降了约67.9%。