青蒿法呢醇合酶原核表达、纯化与功能鉴定

将经race方法克隆到的青蒿倍半萜合酶cdna(af304444)开放阅读框插入到原核表达载体pet30a(+)的ncoⅰ和bamhⅰ酶切位点之间,构建n端和c端均携带有his6表达标签的重组表达载体pet30sesq。将pet30sesq转入大肠杆菌bl21(de3),iptg(isopropyl-beta-d-thiogalactoside)诱导蛋白表达,表达产物经镍琼脂糖柱纯化。纯化蛋白加入酶促反应体系(fpp),gc-ms分析酶促反应体系的正己烷萃取物,结果显示此重组酶可以催化fpp向法呢醇的转化。