hiv-1整合酶核心区可溶性表达及抑制剂筛选

为了实现hiv-1整合酶蛋白核心区(centralcoredomainofintegrase,in-ccd)的可溶性表达,并建立以in-ccd为靶点的抑制剂体外筛选方法,从包含f185k突变hiv-1in基因的质粒中经pcr扩增得到含有f185k突变的in-ccd基因,克隆到pet28b载体上构建重组质粒pin-ccd,转化pin-ccd至e.colibl21(de3)中经iptg诱导、表达,ni-亲和层析纯化,获得in-ccd蛋白。修饰dna底物,以链亲和素包被的磁珠为载体捕获dna产物,结合酶联免疫吸附测定法(elisa)检测in-ccd的去整合活性,并筛选以in-ccd为靶点的抑制剂。结果表明重组蛋白in-ccd实现了高效可溶性表达,纯化后蛋白纯度达95%。建立的elisa可以检测in-ccd的去整合活性,且方法特异性和灵敏度好,可以实现高通量抑制剂筛选。从100个样品中筛选得到5个具有初步抑制in-ccd去整合活性的样品。