2型猪链球菌mocr家族转录调控因子ssu0562基因敲除突变体的构建及毒力分析

目的:构建2型猪链球菌强毒株05zyh33中mocr家族转录调控因子ssu0562基因敲除的突变株,探索ssu0562基因缺失对细菌基本生物学特性和毒力的影响。方法:构建左右两侧为ssu0562基因上下游的同源序列,中间部分为壮观霉素抗性基因(spcr)的基因敲除质粒,通过同源重组的方法筛选ssu0562基因敲除突变株δ0562。对突变株与野生株的基本生物学特性进行系统的比较分析,并且将小鼠作为动物感染的模型来研究突变株的毒力。结果:组合pcr的分析及基因测序结果均表明spcr完全取代了s.suis2中ssu0562基因位点,表明基因敲除突变体δ0562构建成功,反转录pcr(rt-pcr)证实了突变株δ0562中ssu0562基因在转录水平的缺失;在溶血活性、生长速率及对小鼠的致病力方面,突变株δ0562与野生株05zyh33相比均无显著差别,然而革兰染色实验显示突变株δ0562的成链能力明显减弱。结论:猪链球菌强毒株05zyh33的毒力并未因ssu0562基因的缺失而发生显著性改变,表明ssu0562基因并非猪链球菌的毒力决定因子,但很有可能参与猪链球菌成链能力的调控。