蛇毒纤溶酶alfimeprase在大肠杆菌中的可溶表达和纯化

alfimeprase是fibrolase的突变体，是一种蛇毒纤溶酶，有纤溶活性而无出血性。根据alfimeprase的氨基酸序列和大肠杆菌密码子偏爱性，利用pcr的方法合成alfimeprasedna序列，分别融合在nusa和mbp的c端，与分子伴侣fkpa在大肠杆菌origamib(de3)中共表达，融合蛋白nusa/alfimeprase以部分可溶的形式存在，可溶部分占上清总蛋白的25%左右，通过镍柱亲合层析纯化和肠激酶切割得到具有纤溶活性的重组蛋白alfimeprase。本研究是首次报道在大肠杆菌中可溶表达alfimeprase，为以后深入研究其功能及应用奠定了基础。