bax基因诱导鼻咽癌细胞中相关基因的mrna差异显示分析

目的：应用差异显示技术，筛选鼻咽癌相关基因的异常表达。方法：选用连接有bax基因的真核表达质粒psffv-bax-neo,采用脂质体转染法,将其转染到cne2细胞中,以转染有空载的psffv-neo质粒的cne2细胞为对照,采用trizol试剂快速抽取法,提取mrna经逆转录成cdna,用锚式引物和随机引物进行pcr扩增,加入同位素,用6%的测序变性聚丙烯酰胺凝胶上电泳pcr产物进行分离。切下聚丙烯酰胺凝胶上明显的6条差异带,回收差异cdna,进行第二次pcr扩增,经低溶点琼脂凝胶回收,获取大量pcr扩增的差异cdna片段，同位素标记作为探针,抽取rna,进行点样,杂交,洗膜放射自显影等步骤,进行细胞rna的northern印迹斑点杂交。结果：表明4条cdna片段均为cne2细胞表达片段。结论：发现bax可诱导cne2细胞中有某些相关基因表达，并抑制了cne2细胞某些相关基因表达。