利用基因捕获技术建立稳定表达hbv的细胞模型

pgem-hbv1.3质粒经hindiii限制性内切酶消化，将hbv1.3全长dna切下，与同样经hindiii限制性内切酶降解过的pu21连接，得到pu21-hbv重组质粒。将该重组质粒采用电击转染方法导入hepg2细胞中，g418筛选阳性克隆并以x-gal染色，rt-pcr、southernblot等方法验证hbvdna的插入和表达。pu21-hbv重组质粒经测序证明hbv1.3全长dna正确与pu21载体连接，该重组质粒转染hepg2细胞后经g418筛选，得到一系列阳性克隆，southernblot证实hepg2细胞基因组中含hbvdna，rt-pcr结果表明hbvdna在hepg2细胞中有功能基因的转录。hbv1.3已被整合在hepg2细胞染色体中并能稳定表达其rna。稳定的hbv表达细胞模型构建成功。hbv表达细胞模型的建立，为进一步研究相关基因对hbv的转录、复制、转录后调节以及hbv各种蛋白的表达机理研究提供实验材料。