猪戊型肝炎病毒重组蛋白orf2-v1单克隆抗体的制备及抗原表位差异分析

用纯化的猪戊型肝炎病毒dq株重组蛋白orf2-v1免疫balb/c小鼠，取免疫小鼠脾细胞与sp2/0骨髓瘤细胞进行融合，经3次克隆和间接elisa筛选，获得了αc11,αc12,γh1,γf8,bc4和ch86株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株。通过间接elisa测定，单抗效价为:细胞培养上清1∶1.60×103～1∶3.20×103，腹水为1∶1.28×106～1∶2.56×106;经elisa法测定，6株单克隆抗体均与重组蛋白orf2-v1反应，而不与orf2其它部分片段的蛋白反应;将试验中制备的mabs分别用hevswdq株感染的a549细胞涂片进行ifa检测，同时分别用猪的阳性、阴性血清和sp2/0细胞上清做对照，制备的6株mabs对感染细胞均呈现阳性反应，说明其可以与天然的病毒发生反应，并且与阳性多克隆血清比较，以单克隆抗体为一抗，ifa反应表现出良好的特异性。单抗的亚类鉴定结果表明，所有mabs均为igg1型，而且所有单克隆抗体的轻链均为κ链。单克隆抗体抗原识别位点分析结果表明，6株单抗分别针对4个不同抗原位点，mcab-γh1,bc4,ch8识别的位点各不相同，其中mcab-γh1,bc4识别的位点有部分重叠，mcabαc11,αc12,γf8识别同一位点，位于γh1,bc4识别位点的重叠区内。