幽门螺杆菌ⅳ型分泌系统hp0527-c基因的克隆表达及其生物学功能的初步研究

为克隆表达幽门螺杆菌（helicobacterpylori,h.pylori）nctc11637hp0527-c基因，探讨其生物学功能。设计引物扩增，t-a克隆，测序正确后构建表达载体pet-28a-hp0527-c，转化大肠杆菌bl21，经iptg诱导表达后以ni2＋-nta柱获得纯度为98％重组蛋白。经westernblot鉴定正确后，免疫新西兰大白兔获得了较高滴度的多克隆抗体；将重组蛋白作用于bgc-823细胞，rt-pcr检测细胞il-8mrna表达增高；同时用mtt法来检测重组蛋白对细胞增殖的影响，结果呈现一定量的时间和剂量依赖性。已成功克隆了hp0527-c的重组蛋白，初步探讨了其与细胞之间的相互作用，为进一步阐明h.pylori致病机制奠定了基础。