抗凝蛋白eh体外活性检测条件的建立

eh蛋白是一种水蛭素衍生物,它是在水蛭素的n端引入了一小段寡肽,该寡肽可被凝血因子xia(factorxia,fxia)和xa(factorxa,fxa)裂解释放水蛭素的抗凝血酶活性。比较在不同条件下fxa裂解eh蛋白的效果,包括裂解时间(2h,4h,6h,8h,10h,20h)、裂解温度(25℃,37℃,40℃),fxa与eh蛋白摩尔比(1∶300,1∶180,1∶60),反应溶液(水、生理盐水、裂解缓冲液)。分别采用凝块法和th生色底物法检测eh蛋白经fxa裂解后的体外抗凝血酶活性。fxa对eh的裂解活性在一定条件下与反应时间和温度成正比,裂解活性随fxa的摩尔数增加而增强。反应溶液对其裂解活性影响较弱,其中生理盐水为最适裂解溶剂。最终确定eh体外活性检测时最适裂解条件为:用生理盐水稀释eh样品,fxa与eh的摩尔比为1∶180,在37℃裂解6h。此法裂解eh蛋白,操作方便,所测活性重现性好,适合作为eh蛋白质量控制中活性测定的方法。