增强型绿色荧光蛋白的真核表达和纯化

根据编码增强型绿色荧光蛋白(enhancedgreenfluorescentprotein,egfp)的开放读码框(openreadingframe,orf)设计引物,pcr方法扩增出5'端带his标签的egfporf,利用杆状病毒表达系统构建表达egfp基因的重组杆状病毒dna分子,转染sf9细胞。取细胞培养上清进一步感染sf9细胞,荧光显微镜下观察egfp蛋白的表达,ni柱亲和层析纯化表达的egfp蛋白,并将纯化后的egfp用于egfp特异性体液分析。结果显示成功克隆了egfporf,荧光显微镜观察到重组杆状病毒表达的egfp,ni柱亲和层析可获得纯度达90%的egfp蛋白,纯化后的egfp蛋白仍然具有良好的免疫原性,能作为包被抗原分析体液免疫效果。利用杆状病毒表达系统制备egfp,具有产量高、纯化方便及生物活性好的特点。