三种酵母启动子在毕赤酵母中的功能比较

启动子是基因表达调控的重要顺式元件,启动子功能的强弱对于目的基因的表达非常重要。为找到一个启动转录功能较好的启动子,以绿色荧光蛋白(gfp)为报告基因,在毕赤酵母中研究不同启动子对外源蛋白表达的影响。首先采用pcr扩增的方法克隆了酿酒酵母甘油合成关键酶3-磷酸甘油脱氢酶基因启动子pscgpd,借助于载体ppic9k和pgapzb,构建ppic9k-gfp和ppic9k-pg,pgapzb-gfp和pgpdzb-gfp,将重组载体分别转入毕赤酵母gs115和毕赤酵母x33中,在不同渗透压条件下培养重组菌,通过gfp的表达情况比较启动子pscgpd与甲醇氧化酶启动子paox1、3-磷酸甘油醛脱氢酶启动子pgap的功能。荧光显微镜观察结果显示,pscgpd表现为受高渗条件诱导,重组毕赤酵母p.pastorisgs115和p.pastorisx33均能产生稳定的荧光,且在一定范围内随着葡萄糖或nacl浓度的增加,gfp表达强度也有所增加;但分别与对应宿主p.pastorisgs115、p.pastorisx33的启动子paox1和启动子pgap相比,表达水平仍较弱。