共表达o型口蹄疫病毒p1-2a基因和猪白细胞介素18的重组鸡痘病毒的构建

目的:为获得能有效预防o型口蹄疫病毒的重组鸡痘病毒活载体疫苗奠定基础。方法：在o型口蹄疫病毒p1-2a基因上游引入kozak序列，下游通过linker与细胞因子il-18联结，获得p1-2a基因与猪il-18基因融合表达基因盒p1-2a-il-18，将该表达基因盒克隆至鸡痘病毒中间转移载体putal-3c中，构建重组鸡痘病毒转移载体质粒putal-3c-p1-2a-il-18。通过脂质体转染法，将putal-3c-p1-2a-il-18与鸡痘病毒282e4株共转染鸡胚成纤维细胞（cef），通过brdu三次加压筛选，挑选出单克隆重组病毒株。结果：经rt-pcr和间接免疫荧光法鉴定，证明所筛选的1株重组鸡痘病毒在cef中能正确表达p1-2a-il-18基因盒。结论：成功获得了一株共表达o型口蹄疫病毒p1-2a基因和猪白细胞介素18基因的重组鸡痘毒疫苗候选株rfpv-3c-p1-2a-il-18。