可溶性hla-a*0203-bsp原核表达载体的构建及其在大肠杆菌中的高效表达

目的：构建hla-a*0203重链胞外域羧基端融合生物素化酶bira底物肽(bsp)的融合蛋白（hla-a*0203-bsp）的原核表达载体并在大肠杆菌中进行表达。方法：以rt-pcr方法从hla-a2+供者外周血单个核细胞(pbmc)中克隆hla-a*0203重链基因的cdna并测序鉴定，然后以pcr方法构建hla-a*0203-bsp的原核表达载体，在大肠杆菌bl21(de3)菌株中诱导表达并以免疫印迹鉴定。结果：dna测序显示，从3名hla-a2+供者pbmc中克隆的cdna中，只有从供者2获得编码hla-a*0203重链基因的cdna。将编码重链胞外域1-276的序列和编码bsp的序列融合，构建hla-a*0203-bsp融合蛋白的原核表达载体并经测序验证。该融合蛋白在bl21(ed3)中获得高效表达，约占菌体总蛋白的30％；产物相对分子质量约为34kd，与理论大小一致。western印迹分析显示融合蛋白完全存在于包涵体中。结论：成功克隆hla-a*0203重链基因的cdna，构建hla-a*0203-bsp融合蛋白的原核表达载体，并在大肠杆菌中获得高效表达，为制备hla-a*0203四聚体打下基础。