人β干扰素-血清白蛋白融合蛋白在毕赤酵母中的分泌表达

利用重叠pcr技术在体外拼接ifnβ和hsa基因，将得到的融合基因插入到毕赤酵母分泌型表达载体ppic9k中，置于启动子aox1和α交配因子信号肽的作用下，分泌表达融合蛋白ifnβ-hsa。重组质粒ppic9k-ifnβ-hsa经sali线性化，电击转化毕赤酵母km71，经g418筛选得到高拷贝转化子。pcr鉴定后，用甲醇诱导表达，sds-page和westernblot分析表达的融合蛋白ifnβ-hsa表明该蛋白分子量约为90kda且具有hsa的抗原性；用细胞病变抑制法测定发酵液上清中融合蛋白的干扰素活性约为640iu/ml。