含arg9的人抗hbsag单链抗体/egfp融合蛋白基因的构建、表达和内化作用的研究

目的：构建、表达和纯化带有转膜结构域arg9的scfv14/egfp融合蛋白，并对纯化产物的亲和活性和内化作用进行研究。方法：将arg9的编码序列分别重组到scfv14/egfp基因的5'端或3'端或二者之间，将它们分别克隆入原核表达载体pet32a，转化大肠杆菌bl21(de3)lyss进行诱导表达和纯化，用间接elisa方法检测表达产物与hbsag的亲和活性，并用间接免疫荧光检测纯化蛋白的内化活性。结果：经测序及酶切鉴定证实四种融合基因序列完全正确.sds-page和westernblot证实四种融合基因成功表达和纯化.间接elisa检测证实四种融合蛋白均具有hbsag结合活性，间接免疫荧光检测显示n端带有arg9的融合蛋白有较强的内化作用，而且不内化进入hbsag非表达的细胞。结论：成功构建、表达和纯化了scfv14/egfp融合蛋白和三种带有arg9的scfv14/egfp融合蛋白，纯化产物均具有与抗原hbsag亲和的活性，n端带有arg9的融合蛋白与靶细胞作用有较强的内化作用。