分枝杆菌甾酮c1,2位脱氢酶基因敲除的研究

利用分枝杆菌对植物甾醇进行边链降解可产生4-ad（4-烯-雄甾-3,17-二酮）和add（1,4-二烯-雄甾-3,17-二酮），add由4-ad在c1,2位脱氢酶(ksdd)作用下脱氢产生，这两种物质在化学结构上高度相似，难以分离。本文首先扩增出部分ksdd基因，大小为631bp，并以此为基础构建打靶载体puc19-mk。将puc19-mk电转分枝杆菌感受态，通过同源重组敲除分枝杆菌染色体上正常的ksdd基因，使c1,2位脱氢酶失活，以达到4-ad大量积累的目的。结果通过初筛筛选出5株转化子，进行甾体转化实验，发酵144h时，1号转化子的4-ad生成率达到17.52％，比出发菌株提高了192％，而此时add的生成率仅为6.12％，比出发菌株降低了89.9％。