蛇毒纤溶酶alfimeprase在毕赤酵母中的优化表达及活性鉴定

摘要alfimeprase(alf)是蛇毒纤溶酶fibrolase的n端突变体，有纤溶活性而无出血活性。通过双酶切从克隆载体上获取目的基因alf，并将其克隆至毕赤酵母分泌型表达载体ppiczαa，经高效电转化、zeocin筛选鉴定及培养条件ph、每天甲醇流加终浓度、菌体生长密度和甲醇诱导时间的优化，获得了重组alf(ralf)高表达菌株ppicz?a-alf/gs115，且在优化条件下ralf的最高产量达425mg/l。通过his？bind柱纯化后，ralf纯度高达95%，sds-page和westernblot分析表明ralf的分子量约为24kda，且能与一抗特异结合。纤维蛋白平板法纤溶活性鉴定结果进一步说明ralf获得了高活性分泌表达。这即为alf的深入研究和工业化生产应用奠定了重要基础。