铜绿假单胞菌lexa蛋白的纯化及免疫活性分析

目的：对铜绿假单胞菌(pseudomonasaeruginosa,pa)的lexa蛋白进行表达、纯化，并检测其免疫活性。方法：lexa基因片段插入表达载体pet32a(+)，在e.colibl21(de3)中表达。包涵体经洗涤并用8m尿素溶解，镍离子亲合柱层析为第一步纯化，superdex75凝胶过滤层析作为第二步精细纯化，hplc测定蛋白的浓度，将纯化的lexa蛋白经注射途径免疫家兔，制备兔抗lexa血清，采用免疫双扩、elisa及westernblot分析lexa的免疫活性。结果：lexa以包涵体形式表达，经镍离子亲合柱层析和凝胶过滤层析二步组合纯化目的蛋白，经hplc测定目的蛋白的最终纯度为98.97%，表达及纯化的lexa具有良好的免疫活性。