h5亚型禽流感病毒一步法rt-pcr检测方法的建立

针对家禽中流行较为广泛、危害相对大的h5亚型禽流感病毒的血凝素（ha）基因，通过分析流感数据库221个ha序列，在保守区内用oligo6.0软件设计并合成了一对引物，建立了用于快速诊断h5亚型禽流感病毒的一步法rt-pcr方法，其扩增的目的片段大小为372bp。通过对h5亚型禽流感病毒尿囊液和棉拭子浸出液进行不同稀释倍数检测，结果表明病毒尿囊液最低检出量为10-4稀释；阳性棉拭子最低检出量为8倍稀释。用病毒分离和该方法同时检测不同脏器、口咽及泄殖腔棉拭子样品，结果表明该方法检测灵敏度比病毒分离低10～100倍。用该方法检测h1～h15亚型禽流感病毒和鸡新城疫病毒等其他14种禽病病原，仅有h5亚型禽流感病毒扩增出特异性目的条带。该方法具有方便快捷、特异性强、敏感性高等特点，为我国禽流感的快速诊断和分子流行病学调查提供了技术支撑。