枯草杆菌nx-2聚谷氨酸解聚酶的克隆表达及其降解性质研究

利用pcr技术从γ-聚谷氨酸产生菌bacillussubtilisnx-2的基因组dna上扩增出聚谷氨酸内切解聚酶基因(ywtd)，克隆后测序，对该基因编码区进行了序列分析，比对结果表明本文扩增的ywtd基因编码与文献报道的序列相似性为99.0%，碱基的差异均表现为碱基取代，仅有一个碱基取代导致编码氨基酸的变化，即第349位密码子由gcc变为gtc。将ywtd基因克隆入表达载体pet15b中，该载体转化大肠杆菌rosetta(de3)，经0.5mmol/liptg诱导，外源解聚酶蛋白获得高效表达。利用酶的初提液对聚谷氨酸进行降解，结果显示经72小时解聚酶作用后，γ-pga分子量从700kda降到20kda，此后随作用时间的延长，聚谷氨酸分子量趋于定值。