一种多基因串联共表达载体的构建

为了构建一种可用于串联共表达多个基因的原核表达载体,通过pcr引入点突变,对商业载体pet-22b的酶切位点进行定向改造,设计独特的xbaⅰ/speⅰ模块。获得改造成功的载体pet-m22b,测序结果显示启动子、核糖体结合位点、多克隆位点及终止子均位于xbaⅰ和speⅰ两酶切位点间。选取不同来源的基因进行串联组合及表达鉴定,四个基因成功组合于同一载体中,表达效果良好,各基因表达效率不受明显影响。研究构建的载体pet-m22b,使多基因的共表达更加便捷,为蛋白复合物的表达与纯化、代谢通路的异源重建及其优化等研究奠定了良好的基础。