s-2-氯丙酸脱卤酶在毕赤酵母中的重组表达

根据s-2-氯丙酸脱卤酶的基因序列设计引物,克隆重组大肠杆菌中的s-2-氯丙酸脱卤酶基因。将目的基因片段构建到ppic9k载体,经saci单酶切后转化到毕赤酵母gs115中,通过g418抗性ypd平板筛选高拷贝重组子,甲醇诱导成功实现胞外活性表达。重点考察了基因拷贝数和甲醇浓度的影响,结果表明重组子含有12个拷贝,甲醇浓度为1%时较佳,重组脱卤酶的酶活可达236u/l。重组毕赤酵母具有很好的遗传稳定性。对该酶最适反应温度及ph进行研究,表明其最适反应温度为50℃,最适ph为9.5。