利用双启动子载体构建产异丁醇大肠杆菌

为了实现异丁醇代谢途径中关键酶的高效共表达,选择具有双t7启动子的质粒载体pcdfduet、prsfduet和pacycduet,将基因kivd和alss分别克隆至pcdfduet的两个启动子下,yqhd和ilvcd分别克隆至prsfduet或pacycduet的两个启动子下,构建成两种双质粒共表达系统,获得产异丁醇重组大肠杆菌eco(cdf+rsf)和eco(cdf+acyc)。其中重组菌eco(cdf+rsf)发酵产异丁醇达2.7g/l;而重组菌eco(cdf+acyc)产异丁醇能力较强,达3.5g/l。对两种重组菌目标蛋白的表达量及活力进行比较分析,发现重组菌eco(cdf+acyc)中实现了关键酶ahas(alss基因编码)和kdca(kivd基因编码)的高效表达,对提高异丁醇的产量有重要的影响。利用双启动子载体成功构建了具有较高产异丁醇能力的重组菌eco(cdf+acyc),为后续改造以适应工业化生产打下了较好的基础。