含csfve2基因a/d区原核表达载体的构建、表达及其抗原性研究

应用rtpcr方法扩增了编码猪瘟病毒石门株(csfvshimenstrain)囊膜糖蛋白e2全基因,然后将其克隆到pmd18t质粒中,获得重组质粒pmde2。再以pmde2为模板,另行设计两对引物,同时扩增其中一段适于在e.coli中表达且抗原反应性较好的基因片段(e2蛋白ad抗原区基因序列),将扩增的两片段串联插入原核表达载体pet32a中构建成重组质粒pet2e。用酶切和序列分析鉴定插入目的基因的正确性。sdspage和westernblot分析表明,经pet2e转化、iptg诱导的受体菌可表达目的蛋白,克隆在硫氧还蛋白(thioredoxinprotein,trxa)基因下游的e2蛋白基因与trxa基因获得了高效融合表达,并且具有免疫学反应活性,这为猪瘟的血清学诊断方法的建立打下了基础。