重组链激酶及其三种突变体的活性研究

利用pcr技术从streptococucspyogenes的基因组dna中扩增了链激酶的编码基因ska,并进行了序列分析,利用基因删除及定点位变技术获得了删除了c-末端42个氨基酸残基编码区的突变链激酶基因skaδc42,第59位lys残基突变为glu的突变链激酶基因skak59e以及删除c-末端42个氨基酸且第59位lys残基突变为glu的突变链激酶基因skaδc42k59e,将ska及其三种突变体分别克隆到表达载体pet15b上,构建分别表达野生型链激酶(sk)、c-末端缺失42个氨基酸残基的突变体(skδc42)、第59位lys残基突变为glu的突变体(skk59e)及c-末端缺失42个氨基酸且第59位lys残基突变为glu突变体(skδc42k59e)的表达载体psk,pskδc42,pskk59e,pskδc42k59e,分别转化e.colibl21(de3),iptg诱导后在大肠杆菌中实现了高效表达,经亲和层析、离子交换层析及分子筛层析,获得了rsk、rskδc42、rskk59e及rskδc42k59e,活性分析表明rsk与其三种突变体具有相同的比活性。