大容量人天然抗体库的构建、鉴定及初步应用

从未经主动免疫的健康志愿者的外周血淋巴细胞中提取总rna,用rt-pcr扩增人抗体重链(vh)和轻链(vl)可变区基因,得到了6种vh家族基因,11种vl家族基因,这些抗体基因家族覆盖了人抗体基因多样性的95%以上。采用改进的soepcr法将vh基因和vl基因连接成人单链抗体(scfv)基因,并克隆到噬菌粒载体pcantab5e中,将连接产物电转化大肠杆菌tg1,经辅助噬菌体m13ko7超感染,构建了库容为5.58×109的噬菌体单链抗体库。采用bstni酶切法证明,构建的噬菌体单链抗体库具有良好的多样性。以tnf-α为靶,从该抗体库中筛选到了抗tnf-α抗体,这说明该抗体库可用于人源抗体的筛选。