从富集液中发掘麻类脱胶果胶酶基因的技术

为了突破传统可培养技术筛选麻类脱胶用果胶酶基因的不足，通过设计不同总dna提取方法、样品富集方法以及优化pcr反应体系，建立起了一套适合于直接从富集液中发掘麻类脱胶用果胶酶基因的技术。结果表明，震荡培养脱胶时间比静止培养脱胶时间缩短51.5%；通过powersoiltmdnaisolationkit从第4次富集后的震荡发酵中能提取适合的总dna；pcr最优反应体系为：总体积为25ml，mg2+浓度为2.0mmol/l，dntps浓度为0.2ng/μl，引物浓度为0.6μmol/l，dna模板取2.5ng/μl，taq聚合酶量为0.8u。获得的基因序列与已报道的果胶酶基因fj538208序列高度相似，应用该技术成功地从麻类脱胶富集液中克隆到了果胶酶基因。