犬瘟热病毒h蛋白基因重组腺病毒的构建及免疫效果评估

研究选取犬瘟热病毒h蛋白基因为目的基因，利用反转录聚合酶链式反应（rt-pcr）、酶切、连接等方法构建出重组人5型腺病毒穿梭质粒和骨架质粒，两者共转染293ad细胞并包装出重组腺病毒。通过电镜负染、酶切鉴定、westernblot及一步生长曲线测定等方法进行病毒的生物学特性鉴定，证明犬瘟热病毒h蛋白基因重组腺病毒构建正确。犬分别肌肉接种cdv疫苗毒和重组腺病毒，并检测免疫后第14，28，42，56，70，84d时犬血清中抗cdv中和抗体的变化情况。结果显示，犬免疫重组腺病毒后体内产生的抗cdv平均中和抗体水平高于对照组，滴度最高达2-8。研究表明，正确构建的重组腺病毒具有良好的免疫原性，诱导产生的抗犬瘟热病毒中和抗体达到犬最低免疫保护水平，为进一步研发犬瘟热病毒活载体疫苗提供理论依据。