人神经生长因子基因在大肠杆菌中的克隆、表达及产物纯化

从人胎盘组织中提取总dna，经pcr扩增编码人β神经生长因子（β-ngf）成熟肽的基因，并克隆到大肠杆菌表达载体pet15b中。重组质粒pet15b-ngf经测序与报道的完全一致。重组质粒转化大肠杆菌bl21(de3)plyss，经iptg诱导表达得到16kd的目的蛋白带，与预期的大小一致，ngf表达量约占全菌总蛋白的25%.经过亲和层析柱（ni2+-chargedidahis-bindcolumn）纯化后得到了单一的ngf蛋白条带，蛋白纯度可达90%以上，从每升表达菌液中可以得到4.56mgngf。表达产物的western印迹鉴定结果显示：重组人神经生长因子能与兔抗人β-ngf的多克隆抗体发生特异性结合反应，在16kd处出现单一的条带，表明诱导表达的重组ngf具有免疫学活性。鸡胚背根神经节感觉神经元鉴定试验表明，本实验表达的重组ngf具有良好的生物学活性。