h5n1禽流感病毒ha基因在昆虫细胞中的表达及生物活性鉴定

经rt-pcr扩增了h5n1亚型禽流感病毒血凝素基因(ha)片断，限制性内切酶酶切后将其克隆到pfastbachta杆状病毒转座载体，经酶切鉴定及测序，筛选出阳性重组转座载体pfastbac-h5。将pfastbach5转化含有杆状病毒穿梭载体（bacmid）的dh10bac感受态细胞，通过蓝白斑筛选和pcr鉴定获得重组杆状病毒穿梭载体rbacmid-h5。rbacmid-h5在脂质体介导下转染sf9昆虫细胞，sds－page蛋白电泳、westernblot、血凝试验和血凝抑制试验分析表明：分子量约63kd重组血凝素蛋白（rh5）在sf9昆虫细胞中实现了高效表达。rh5具有血凝活性，而且其血凝活性能够被h5n1禽流感病毒高免血清所抑制；rh5免疫鸡诱导产生针对h5n1禽流感病毒亚型特异的血凝抑制抗体，说明表达的重组蛋白具有与天然蛋白相似的生物活性。