sumo蛋白酶活性片段的表达、纯化及活性测定

利用pcr技术人工合成编码酿酒酵母泛素样特异性蛋白酶1(ubiquitin-likespecificprotease1，ulp1)第403到621个氨基酸残基之间的dna片段ulp1p，并连接到大肠杆菌表达载体pet-3c中,构建出重组表达质粒pet-ulp1p。将重组质粒转化至大肠杆菌bl21(de3)中,氨苄青霉素抗性筛选转化子。经iptg诱导4h后,sds-page结果显示，ulp1p为可溶性表达，表达量占菌体总蛋白的50.8%。通过ni-nta凝胶亲和层析和g-25凝胶层析联用可以获得纯度大于95%的ulp1p。western-blotting分析表明,ulp1p能与6xhis抗体产生免疫反应。以重组蛋白sumo-hegf(人表皮生长因子)和gst-sumo-mt(金属硫蛋白)为底物进行酶切分析，结果显示，ulp1p能特异性水解这两种sumo融合蛋白，其比活为1.386x104u/mg。