腺病毒介导重组hkgf基因转染hacat细胞及其表达

将pcr扩增得到的人角质细胞生长因子（hkgf）基因片断插入穿梭载体padtrack-cmv,产生重组质粒padtrack-cmv-hkgf，经pmei线性化后，通过电转法导入含腺病毒骨架质粒padeasy-1的大肠杆菌bj5183进行同源重组，得到重组腺病毒质粒padeasy-hkgf。采用lipofectamine2000将padeasy-hkgf转染到hek-293细胞，在hek-293细胞中包装并扩增出大量的腺病毒，经pcr鉴定含有hkgf基因。获得的重组hkgf腺病毒感染颗粒可高效感染hacat细胞。western-blot结果显示，重组腺病毒感染的hacat细胞可分泌表达hkgf蛋白。