响应曲面法优化心肌肌钙蛋白i在e.coli中表达及纯化

为优化已构建表达人心肌肌钙蛋白i（ctni）基因工程菌的表达条件，获得纯度较高的ctni作为抗原用于研制临床上检测心肌梗塞的试剂盒；通过pbd(plackettburmandesign)设计，考察各因素对目的蛋白ctni表达的影响，证明诱导时间、ph、kcl浓度是影响最大的三个因素，通过响应曲面法（rsm）优化对ctni表达影响最大的三个因素，构建回归方程预测ctni的表达所占总蛋白的百分比，在最优条件下目的蛋白表达所占菌体总蛋白含量的26%。经过硫酸氨沉淀和deae-cellulose离子交换层析，将重组的ctni蛋白进行纯化，经sds-page检测后，目的蛋白只有一条带；经western-blottting和临床检测ctni试剂盒检测后，证明纯化的ctni有良好的特性，可以作为免疫动物的抗原，制备特异性强，亲和力好的单克隆抗体，也可以作为临床上标定不同ctni检测方法的校准物。