重组人纤溶酶原基因的酵母表达、产物纯化及鉴定

目的:研究重组人纤溶酶原丝氨酸蛋白酶结构域（rhplg-sp）的酵母表达、纯化及理化性质。方法:采用7.5l发酵罐对巴斯德毕赤酵母(pichiapastoris)工程菌rhplg-sp/gs115进行高密度培养、甲醇诱导表达rhplg-sp，培养液经三步纯化：超滤、sephacryls-100、sp-sepharoseff，将活性组分透析后冷冻干燥。等点聚焦电泳、hplc、质谱分别检测rhplg-sp等电点、纯度和分子量；纤维蛋白平板、肽底物s-2403分别测定rhplg-sp激活后的纤维蛋白溶解和酰胺水解活性。结果:7.5l高密度发酵可获得约为400mg/l培液的表达量，经三步纯化后制备的rhplg-sp纯度大于96%。理化分析显示rhplg-sp的等电点为7.5~7.8，分子量：27877da，比活性：23.6u/mg。结论:初步建立了rhplg-sp酵母工程菌的高密度培养、表达及纯化工艺，所制备半成品活性与血浆提取的plg相近，具备放大生产和应用的潜力。